Taq酶抗体

PCR(Polymerase Chain Reaction, 聚合酶链式反应)技术是最为成熟、临床应用最广泛的分子诊断技术。Taq DNA聚合酶抗体作为热启动PCR检测的重要原料,需求量巨大。 厦门同仁心生物技术有限公司(以下简称“同仁心”)自主研发的双封闭热启动Taq DNA聚合酶抗体(专利号:ZL 2021 1 0548532.9),通过同时封闭Taq酶的聚合酶活性及5’-3’外切酶活性,有效提高了扩增的特异性及PCR试剂的稳定性,并对不同类型的Taq酶具有广谱结合能力。疫情期间,同仁心Taq DNA聚合酶抗体累计销售1600000mg,可产出超12亿人份新冠检测试剂,市场占有率高达20%,性能领先于同类产品。

推荐配对货号产品名称类别推荐方法推荐用途申请试用
HS23 Taq antibody I Ab 多表位阻断,配合Taq聚合酶使用 RT-PCR、HS PCR

(1)支持全预混试剂配制,有效提升PCR试剂稳定性

将同仁心Taq DNA聚合酶抗体及另外两种商品化Taq DNA聚合酶抗体分别封闭Taq DNA聚合酶,配置成含引物探针的全预混液,稳定性 测试条件设置为:1)4℃放置3、5、7天;2)37℃放置3、5、7天。相同PCR程序上机,观察扩增曲线和Ct值变化。

 

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稳定性测试结果详见图1(4℃)、图2(37℃),可以看出,同仁心Taq DNA聚合酶双封闭抗体与其它两款竞品相比,具有更加优秀的稳定性, 不同温度及保存时间下扩增曲线和Ct值无明显变化。

 

(2)有效封闭Taq DNA聚合酶活性,并可快速释放酶活

将同仁心Taq DNA聚合酶抗体及另外两种商品化Taq DNA聚合酶抗体,分别与Taq DNA聚合酶按照比例混合后,按照《GB/T 35542-2017 Taq DNA聚合酶》中附录A的方法测试酶活,计算同仁心Taq DNA聚合酶抗体在不同温度(55℃、65℃)下的封闭效率。

由图3可知,同仁心Taq DNA聚合酶抗体与Taq 酶的亲和力非常高,在65℃下同仁心Taq DNA聚合酶抗体仍然可以封闭Taq 酶的活性,因此能够更加有效地抑制引物二聚体和非特异性扩增。

 

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用同仁心Taq DNA聚合酶抗体封闭Taq酶,并在95℃下热激30s,检测Taq DNA聚合酶活性(参照《GB/T 35542-2017 Taq DNA聚合酶》中附录A方法)。可见,95℃热激30s后,同仁心Taq DNA聚合酶抗体可充分解除封闭,释放98%的酶活。

 

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(3)有效封闭Taq DNA聚合酶的外切酶活性

将同仁心Taq DNA聚合酶抗体及另外两种商品化Taq DNA聚合酶抗体,分别与Taq DNA聚合酶按照比例混合后,配置成含引物探针的全预混液,在37℃放置0、3、5、7天,观察体系中荧光信号的变化。

 

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由图4可以看出,同仁心双封闭抗体可有效封闭Taq DNA聚合酶的5’-3’外切酶活性。

 

(4)可封闭多种类型Taq酶

用同仁心Taq DNA聚合酶抗体分别封闭三种市面主流厂家Taq DNA聚合酶,封闭比例为1mg:4000U,测量荧光值以及封闭效率(参照《GB/T 35542-2017 Taq DNA聚合酶》中附录A方法)。可以看到,对于市面主流Taq酶,同仁心Taq DNA聚合酶抗体均能有效封闭其活性。

 

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(5)纯度高,无核酸外切酶及核酸内切酶残留

按照《GB/T 35542-2017 Taq DNA聚合酶》中附录B、附录C的方法对同仁心Taq DNA聚合酶抗体的核酸外切酶及核酸内切酶残留进 行检测,检测结果(图5)表明同仁心Taq DNA聚合酶抗体无核酸外切酶及核酸内切酶残留;将同仁心Taq DNA聚合酶抗体进行Tris-gly-SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳,电泳结果表明抗体纯度高。

 

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(6)临床样本外部测评

本组数据来自“F*”客户,该客户从事分子病理研发多年。实验室采用同仁心Taq DNA聚合酶抗体进行测评,测评结果详见图6,结果显示在低拷贝模板(100copies、10copies)条件下,同仁心Taq DNA聚合酶抗体组别在FAM、ROX通道均有较好表现,扩增曲线的扩增效率、线型较好。

 

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