AMH结构及免疫活性原料介绍

* 来源 : * 作者 : admin1 * 发表时间 : 2018-05-09 * 浏览 : 1770

抗缪勒氏管激素（AMH），也被称为缪勒氏管抑制因子（MIF）,缪勒氏管抑制激素（MIH），缪勒氏管抑制物质（MIS），是 140kDa，二聚体糖蛋白激素，是TGF-β超家族的一员。

一、背景

所有该家族的成员都是二聚体糖蛋白，在组织生长和细胞分化中起不同的调节作用。跟家族的其他成员一样，AMH蛋白的合成首先是作为一个大的前体，包含18个信号氨基酸序列，再加工成前激素原，最终生成同型二聚体。分泌前，成熟的激素经历糖基化和二聚体化，形成一个140kD的二聚体。二聚体由两个完全一样的70kD单体亚基，通过二硫键链接形成。每个单体由N端（即“pro”区）和C端（即“mature”区）组成。在细胞浆转运过程中，70kD的AMH的单体会在“pro”区和“mature”区间的特定位点水解形成两段多肽：58kD的“pro”区和12kD的“mature”区。水解后，这两段多肽仍会以非共价形式结合。

二、基因及蛋白组成

编码AMH的基因位于19号染色的短臂上，AMH的氨基酸序列见下图

三、早期AMH的检测试剂

国外早期的AMH检测试剂（如DSL/IOT/Beckman Gen II等），对不同形式的AMH（如天然、重组（加工过或为加工））有不同的亲和力。这些试剂的抗体即可以结合单体AMH也可以结合二聚体AMH，无法对其有效辨别。DSL/IOT两种试剂，由于使用不同的抗体及不同的校准品，在测定同一样品时，会得出不同的检测结果；有研究表明，Gen II的测试结果会比DSL的低20-40%；但Gen II申报数据表明，Gen II的测试结果会比DSL的高出40%。这些数据表明，AMH在某些条件下存在形式并不稳定，且测试缺乏公认的检测标准。这在一定时间内限制了AMH在生殖评估、科研转化等方面的应用。

目前，国内的AMH检测主要以Beckman Gen II的ELISA结果为参考依据，如Roche cobas AMH即将检测结果溯源至此。

四、AMH的结构

AMH由两个完全一样的70kD单体亚基，通过二硫键链接形成。每个单体由560个氨基酸排列而成。一般情况下，同型二聚体或其他低聚体的亚基是对称排列的。尽管有些例子表明，二聚体中的对称性是可以被破坏的。在这种情况下，一个单体上可被抗体识别的位点，在另一条单体上可能无法被识别。目前，没有理论或机理表明，AMH是一种对称性被破坏的二聚体。因此，识别一条单体上位点的抗体，也可以识别另一条单体上的位点。

通过还原剂处理，二聚体AMH二硫键打开，AMH会形成两条完全一致的单体。

在451氨基酸处，即—RAQR︱SAGA—存在水解位点，通过蛋白酶处理，全长AMH将分为两段多肽，1-451氨基酸为“pro”区，452-560氨基酸为“mature”区。

水解后的AMH自发聚合，可形成非共价结合的水解-再结合形式的AMH。

移除信号肽（1-18）和7个前肽，AMH会产生2个片段，一个有26-451氨基酸；另一个有452-560氨基酸。后者为AMH的mature片段。26-451还可以继续处理为两个片段，一个为26-229，这里称为N-ter-pro区，另外的230-451这里称为midpro区。

尽管目前对于AMH在临床相关样本中的形式尚不明确，但是已知在哺乳动物代谢循环中可存在不同形式的AMH蛋白，在多种组织和细胞中也可确认有不同形式的AMH蛋白。

五、AMH抗体配对选择举例

AMH存在不同的形态。针对不同区域位点的抗体配对，对不同形态的AMH检出有所不同。下图例举了针对不同位点的抗体

A、B位于“pro”区，C、D位于“mature”区（A、B、C、D仅为所处区域的指示，不代表特定位点的抗体）。

AMH是对称性排列的二聚体，在夹心法ELISA中，同一抗体即可作为捕获抗体用，也可作为检测抗体用，如C-C（如无特殊说明，前者均作为捕获抗体，后者均作为检测抗体）这一配对可作为AMH的mature-mature区检测。由于针对同一位点，该配对的检测不受样本水解与否的影响。类似的，A-A可作为AMH的pro-pro区检测。C-D可作为AMH的mature-mature区检测。A-C可作为AMH的pro-mature区检测。D-B可作为AMH的mature-pro区检测。

把每一组配对都用于试剂来测量同一样本中AMH含量。结果如下表所示

	C-C	A-A	C-D	A-C	D-B
Sample	6.553	0.369	12.012	23.525	>19
Calibrators(OD value)
Blank	0.086	0.069	0.093	--	0.062
0.1ng/ml AMH	0.106	0.076	0.133	--	0.08
10ng/ml AMH	1.26	1.178	2.94	--	1.5

不同配对的试剂被认为测量样本中不同的形态的AMH。C-C测量的是全长二聚体和mature区二聚体的AMH。C-D mature-mature区检测，测量的是全长二聚体和单体，mature区单体和二聚体AMH。因为这一配对可检测更多形态的AMH，所以测定的值要高于C-C的检测。A-C的pro-mature区检测，测量全长二聚体和单体，不能被C-D识别的全长和单体的AMH片段。因此，存在有的亚型可以被pro-mature检出，但是不能被mature-mature识别。